組織芯片的制備步驟
根據制作方法,可以分為石蠟包埋的組織芯片和冰凍芯片兩種。腫瘤中常用的是石蠟包埋的組織芯片,通過組織芯片制作機細針打孔的方法,從眾多的組織蠟塊(稱為供體蠟塊)中采集到數十至上百的圓柱形小組織(組織芯),并將其整齊排列另一空白蠟塊(稱為受體蠟塊)中,而制成組織芯片蠟塊。然后對組織芯片蠟塊進行切片,再將切片轉移到載玻片上制成組織芯片。
其制作步驟如下:
制作模具蠟塊,大小為45mm×20mm,在模具蠟塊上打出間距為0.1 mm、直徑為0.6 mm 的小孔,每個小孔以坐標準確定位;
樣本蠟塊根據HE染色觀察,對石蠟標本中有代表性的點進行標記,包括典型的腫瘤和相應的正常組織,選定并分別在HE切片和相應石蠟組織塊上標記取樣組織的位點,用內徑0.6 mm 的不銹鋼針進行穿刺,深度2~3mm,將其固定于模具蠟塊的小孔內;
切片前,蠟塊需在4中預冷4h左右,然后夾在切片機上進行修正,等修到全部組織完整為止。用-20預冷冰袋貼在蠟塊上5-10min左右,快速連續切片30-50張左右,再用冰袋冷凍組織塊。
將模具蠟塊以4μm厚度切片,敷貼于載玻片或尼龍膜等固相載體上,就制成了組織芯片。
圖:組織芯片制備流程示意圖
小結與展望
組織芯片作為一項新興的生物學研究技術, 正以它優越性展示著自己的潛力。它的應用實現了對細胞、蛋白、核酸等生物組分的準確、快速、大信息量的檢測,使實驗效率大大提高。同時與二代測序技術配合使用,在尋找腫瘤基因變異及分子標志物中有很好的互補作用,提供了腫瘤診斷和預后的分子標志物的批量檢測,在腫瘤研究中發揮著不可取代的作用。我們相信,在生命科學飛速發展的后基因組時代,組織芯片將在腫瘤研究中發揮越來越重要的作用。